1 范圍(wei)：本標準規定了醫(yi)藥工業無菌(jun)室和潔凈區中浮游菌(jun)的測(ce)試條(tiao)件和測(ce)試方(fang)法。

　　本(ben)標準(zhun)適用于醫(yi)藥工業(ye)無(wu)(wu)菌(jun)室和(he)潔(jie)凈區，無(wu)(wu)菌(jun)室或局部空氣凈化(hua)區域(yu)(包括潔(jie)凈工作臺)的浮游菌(jun)的測試和(he)環境的驗(yan)證。

　　2 引用標準：GB/T 16293?2010

　　藥品生(sheng)產管理規范(1998修(xiu)訂)附錄。

　　3 標準

　　4 測試(shi)方(fang)法

　　4.1 方法提(ti)要

　　本(ben)標本(ben)采用的(de)方(fang)法是計數濃(nong)度(du)法。即通過收集(ji)懸游在空氣中的(de)生(sheng)物(wu)性粒子于專門的(de)培(pei)養基(選擇(ze)能證實其能夠支持微生(sheng)物(wu)生(sheng)長的(de)培(pei)養基)，經若干(gan)時間(jian)和適宜(yi)的(de)生(sheng)長條(tiao)件下讓(rang)其繁殖(zhi)到可見菌(jun)落計數，以判定該潔室的(de)微生(sheng)物(wu)濃(nong)度(du)。

　　4.2人員的(de)職責及培訓

　　無菌(jun)室的(de)(de)測(ce)試人員應進行本的(de)(de)培訓并(bing)獲得相應的(de)(de)資(zi)格后才能才能履行對無菌(jun)室測(ce)試的(de)(de)職責，其中包(bao)含涉及(ji)的(de)(de)衛(wei)生知識(shi)和基本的(de)(de)微生物知識(shi)。

　　無(wu)菌室的測試人(ren)員應選擇與生產操作的空氣(qi)潔(jie)凈度要(yao)求相(xiang)適應的穿戴方式，外面的衣(yi)服不(bu)能帶進100000級(ji)以(yi)上的區(qu)域。

　　4.3 儀器、輔助設備(bei)和培養基

　　選擇(ze)合適的(de)浮游菌(jun)采(cai)(cai)樣器，包括采(cai)(cai)用無油的(de)抽氣泵，較低(di)的(de)氣流(liu)流(liu)速和較大的(de)采(cai)(cai)樣流(liu)量，以保(bao)證培養基(ji)表面的(de)水分布被吹干。

　　本(ben)測試需要具備(bei)儀器(qi)、輔助設備(bei)和培養基如下：

　　a) 浮游(you)菌(jun)采樣器;

　　b) 培養皿;

　　c) 高(gao)壓消毒鍋;

　　d) 培養基;

　　e) 恒溫培養箱;

　　4.4 浮游(you)菌采樣器原理

　　浮游菌采(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)樣(yang)器一般采(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)用撞(zhuang)擊法機理，可分為(wei)夾縫式(shi)(shi)采(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)樣(yang)器、離(li)心(xin)式(shi)(shi)或針孔(kong)式(shi)(shi)采(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)樣(yang)器。夾縫式(shi)(shi)采(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)樣(yang)器由(you)內(nei)部(bu)風機將氣流吸(xi)(xi)入，通過(guo)采(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)樣(yang)器的(de)(de)夾縫式(shi)(shi)平板(ban)，將采(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)集空氣噴射(she)并撞(zhuang)擊到緩(huan)慢的(de)(de)平板(ban)培(pei)養(yang)基表面，附(fu)著(zhu)的(de)(de)活(huo)微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)粒子經(jing)培(pei)養(yang)后(hou)(hou)(hou)形成(cheng)菌落(luo)。離(li)心(xin)式(shi)(shi)采(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)樣(yang)器由(you)于內(nei)部(bu)風機的(de)(de)高(gao)速旋(xuan)轉，氣流從才樣(yang)器的(de)(de)前(qian)部(bu)進入后(hou)(hou)(hou)部(bu)流出，在離(li)心(xin)力(li)的(de)(de)作(zuo)用下，空氣中的(de)(de)活(huo)微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)粒子有足夠的(de)(de)時間撞(zhuang)擊到的(de)(de)固型培(pei)養(yang)條上，附(fu)著(zhu)活(huo)的(de)(de)微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)粒子經(jing)培(pei)養(yang)后(hou)(hou)(hou)形成(cheng)菌落(luo)。針孔(kong)式(shi)(shi)采(cai)(cai)(cai)(cai)(cai)樣(yang)器是(shi)氣流通過(guo)一個金屬蓋(gai)吸(xi)(xi)入，蓋(gai)子上是(shi)密集的(de)(de)經(jing)過(guo)機械加工的(de)(de)特制小孔(kong)，通過(guo)風機將收集到的(de)(de)細小的(de)(de)空氣直接(jie)撞(zhuang)擊到平板(ban)培(pei)養(yang)基表面，附(fu)著(zhu)的(de)(de)活(huo)物(wu)(wu)微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)粒子經(jing)培(pei)養(yang)成(cheng)型后(hou)(hou)(hou)形成(cheng)菌落(luo)。

　　4.5 測試(shi)要點(dian)

　　4.5.1 必須按照儀器的(de)檢定(ding)周期，定(ding)期對測試儀器作檢定(ding)。應(ying)使(shi)用(yong)檢定(ding)合格，并且使(shi)用(yong)有效期內的(de)儀器。

　　4.5.2 測試(shi)儀器未(wei)進入被測區(qu)域時，若必需，則先清洗表面吧，或(huo)(huo)在相(xiang)應的無菌室(shi)內準備和存(cun)放(用保護罩(zhao)或(huo)(huo)其他適當地外罩(zhao)保護儀器)。

　　4.5.3 在100級(ji)無(wu)菌室(shi)內用紙(zhi)時，上面應蒙上一(yi)張透明(ming)不(bu)(bu)沾塵的覆蓋物(wu)，在100級(ji)的無(wu)菌室(shi)內不(bu)(bu)能用鉛筆的橡皮。

　　4.5.4 使(shi)用測試儀器時應嚴格按照(zhao)說明書操作。

　　4.5.4.1 儀器(qi)開機，預熱到穩定(ding)后，方可按說明書的規定(ding)對(dui)儀器(qi)進行校正，同時檢查采樣流(liu)量，并(bing)根據采樣量設定(ding)時間。

　　4.5.4.2 采樣(yang)口必須用(yong)使用(yong)便于消毒及化(hua)學性(xing)能穩定(ding)的材料制造。

　　4.5.4.3 采樣(yang)管嚴禁滲漏(lou)，內壁(bi)應光滑。

　　4.5.4.4 采樣管的(de)長度(du)應根據測點(dian)的(de)高度(du)定，盡(jin)量(liang)減少彎曲。

　　4.6 培養皿

　　4.6.1 一(yi)般采(cai)用(yong)φ90mm×15mm規格的培(pei)養(yang)皿。可根據所選用(yong)采(cai)樣器選擇合適的培(pei)養(yang)皿。

　　4.6.2離(li)心式(shi)采樣器采用(yong)的固型培養條(tiao)

　　4.7 培養基

　　大豆酪蛋白瓊脂(zhi)培(pei)(pei)養(yang)基(TSA)或沙氏(shi)培(pei)(pei)養(yang)基(SDA)或其他用戶(hu)認可并經驗證的培(pei)(pei)養(yang)基。

　　4.8 恒溫培養箱

　　必須定期對恒溫培養箱進(jin)行效驗

　　4.9 測(ce)試步驟(zou);

　　4.9.1 測試(shi)前儀器(qi)、培養皿表面必須嚴(yan)格消毒(du)。

　　4.9.1.1 采樣器(qi)進入被測房間(jian)前先用消毒房間(jian)的消毒劑滅菌，用于100級(ji)無菌室的采樣器(qi)

　　宜預先放在被測房(fang)間內。

　　4.9.1.2 用(yong)消毒劑擦凈培(pei)養皿的(de)外表(biao)面。

　　4.9.1.3 采(cai)樣前，先用(yong)消毒(du)劑消毒(du)采(cai)樣器的(de)頂蓋、轉盤(pan)以及罩子的(de)內外面，采(cai)樣結束，再用(yong)消毒(du)劑輕(qing)輕(qing)噴射罩子的(de)內壁和轉盤(pan)。

　　4.9.1.4 采(cai)(cai)樣口及采(cai)(cai)樣管，使用前必(bi)須高溫滅菌。如用消毒劑對采(cai)(cai)樣管的外壁及內壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒(dao)掉(diao)并晾(liang)干。

　　4.9.1.5 采(cai)樣者應穿戴與(yu)被測潔凈區域相(xiang)應的工作(zuo)服，在(zai)轉盤(pan)上放入或(huo)調換培養皿前，雙手用消毒劑消毒或(huo)帶無菌手套操作(zuo)。

　　4.9.1.6 采(cai)樣(yang)儀(yi)器經消(xiao)毒后先(xian)不放入培養(yang)皿，開啟浮游菌(jun)采(cai)樣(yang)器，使儀(yi)器中的殘余消(xiao)毒劑蒸發，時間不少于5min，并檢查(cha)流量(liang)并根據采(cai)樣(yang)量(liang)調整(zheng)設定時間。

　　4.9.1.7 關閉浮(fu)游采(cai)樣(yang)器，放入培養皿，蓋(gai)上蓋(gai)子。

　　4.9.1.8 置采(cai)樣(yang)口于采(cai)樣(yang)點后(hou)，開啟(qi)浮游(you)菌采(cai)樣(yang)器進行采(cai)樣(yang)。

　　4.10 培養

　　4.10.1 全部采樣結束后(hou)，將(jiang)培養皿倒置于恒溫(wen)培養箱中(zhong)培養。

　　4.10.2 采用(yong)大豆酪(lao)蛋白瓊脂培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(TSA)配制的培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)經采樣后(hou)，在30℃～35℃培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，時間(jian)不(bu)得少(shao)于2d;采用(yong)沙(sha)氏(shi)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)(SDA)配制的培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)皿(min)經采樣后(hou)，在20℃～25℃培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)，時間(jian)不(bu)少(shao)于5d。

　　4.10.3每批培(pei)養基應(ying)有對照試驗，檢驗培(pei)養基本身是否污染。可每批選定3只培(pei)養皿作對照培(pei)養。

　　4.11 菌落計數

　　4.11.1 用肉眼對培養皿(min)上所有的菌(jun)落直接計數(shu)、標(biao)記(ji)或在菌(jun)落計數(shu)器上點計，然(ran)后(hou)用5～10倍(bei)放大鏡檢查，有否遺漏。

　　4.11.2 若(ruo)平板上(shang)有2個或(huo)(huo)2個以(yi)(yi)上(shang)的(de)菌(jun)落重疊，可分辯(bian)時仍(reng)以(yi)(yi)2個或(huo)(huo)2個以(yi)(yi)上(shang)菌(jun)落計數。

　　4.12 注意事項

　　4.12.1 使(shi)用前應仔(zi)細(xi)檢查每個培養(yang)皿質量，培養(yang)基及培養(yang)皿有變質、破損或污(wu)染(ran)的不能用使(shi)用的。

　　4.12.2 對培(pei)養基、培(pei)養條件及其他參數作(zuo)詳(xiang)細(xi)記錄(lu)。

　　4.12.3 由于細菌(jun)種類繁多，差(cha)別甚大，計(ji)數時(shi)(shi)一般用透射光于培(pei)(pei)養皿(min)面或(huo)真面仔細觀察，不(bu)要有遺漏計(ji)培(pei)(pei)養皿(min)邊緣生長的(de)菌(jun)落，并須要菌(jun)菌(jun)落或(huo)培(pei)(pei)養基沉淀(dian)的(de)物區別，必(bi)要時(shi)(shi)用顯微鏡(jing)鑒(jian)別。

　　5 測試(shi)規則(ze)

　　5.1 測試條件

　　在測(ce)試(shi)之前要，要對(dui)無菌室(shi)相關(guan)參數進行預先測(ce)試(shi)，這類測(ce)試(shi)將會測(ce)試(shi)懸(xuan)浮(fu)粒(li)子的環境條件，例如：這種預先測(ce)試(shi)或可包(bao)括：

　　a) 溫(wen)度(du)(du)和(he)相(xiang)對濕(shi)度(du)(du)的(de)測試。 無菌室的(de)溫(wen)度(du)(du)和(he)相(xiang)對濕(shi)度(du)(du)應與其生產及工藝要求相(xiang)適

　　應(ying)(無特殊要求時，溫度控(kong)(kong)制在18℃～26℃，相對濕度控(kong)(kong)制在45%～65%之(zhi)間為(wei)宜)。同時滿

　　足(zu)測試儀(yi)器的(de)使(shi)用范圍;

　　b) 室(shi)內送風量或風速的測試的測試，或壓(ya)差的測試;

　　c) 過(guo)濾器的泄漏測試

　　5.1 測試(shi)狀態(tai)

　　靜(jing)態和動態兩種狀(zhuang)態均可進行(xing)測試。

　　靜態測試時(shi)，室內測試人(ren)員不得多于2人(ren)

　　浮游菌測(ce)試前,被測(ce)定(ding)無菌室(區)由用戶決定(ding)是否需要預(yu)先消毒(du).

　　浮游菌測(ce)(ce)(ce)試(shi)時應標明(ming)測(ce)(ce)(ce)試(shi)時所采用的狀態和室(shi)內測(ce)(ce)(ce)試(shi)人員數(shu)。

　　5.3 測試時間

　　5.3.1 在(zai)(zai)空態或靜(jing)態a測(ce)試(shi)時(shi)，對(dui)單(dan)(dan)向(xiang)(xiang)流無(wu)(wu)菌室而言，測(ce)試(shi)宜(yi)在(zai)(zai)凈化空氣(qi)調節系統正(zheng)常運行(xing)時(shi)間不(bu)少(shao)于10min后開始。對(dui)非(fei)單(dan)(dan)向(xiang)(xiang)流無(wu)(wu)菌室，測(ce)試(shi)宜(yi)在(zai)(zai)凈化系統正(zheng)常運行(xing)時(shi)間不(bu)少(shao)于30min后開始。在(zai)(zai)靜(jing)態b測(ce)試(shi)時(shi)，對(dui)單(dan)(dan)向(xiang)(xiang)流潔(jie)凈是(區)，測(ce)試(shi)宜(yi)在(zai)(zai)生產操作人(ren)員撤離現場并經過10min自(zi)凈后開始;;對(dui)非(fei)單(dan)(dan)向(xiang)(xiang)無(wu)(wu)菌室，測(ce)試(shi)宜(yi)在(zai)(zai)生產操作人(ren)員撤離現場并經過20min自(zi)凈后開始。

　　5.3.2 在動態測試時(shi)，則須記(ji)錄生(sheng)產(chan)開始的(de)時(shi)間以及測試時(shi)間。

　　5.4.浮游菌濃度的計算

　　5.4.1采樣點數量及其布置

　　5.4.1.1 少采(cai)樣點數目

　　浮游菌的采(cai)樣(yang)點位置可(ke)參照GB/T16292-2010

　　a)工作(zuo)區測(ce)點位置離地(di)0.8～1.5m左右(略(lve)高于工作(zuo)面)。

　　b)送(song)風口測點位置離開送(song)風面30cm左右。

　　c)可在(zai)關鍵(jian)設備或關鍵(jian)工作活(huo)動范圍處增加測點。

　　5.4.2 小采(cai)樣量

　　浮游(you)菌每(mei)次小采樣(yang)量見表1。

　　表1小采樣量

　　5.4.3 采(cai)樣次數(shu)

　　每個(ge)采樣點一般采樣一次。

　　5.4.4 采樣注意事項

　　5.4.4.1 對(dui)于(yu)單(dan)向(xiang)流(liu)無菌室(shi)或送風口(kou)，采樣器采樣口(kou)朝應(ying)正(zheng)對(dui)氣(qi)流(liu)方向(xiang);對(dui)于(yu)非單(dan)向(xiang)流(liu)無菌室(shi)，采樣口(kou)向(xiang)上。

　　5.4.4.2 布置采樣(yang)點時，至(zhi)少應(ying)盡量(liang)避(bi)開塵粒較集中的(de)回風口。

　　5.4.4.3 采(cai)樣(yang)(yang)時，測試人員應站在采(cai)樣(yang)(yang)口的下風側，并盡量少走動。

　　5.4.4.4 采取一切(qie)措(cuo)施防止(zhi)采樣過程的污(wu)染(ran)和其他可能對樣本的污(wu)染(ran)。

　　5.4.4.5 培養(yang)皿(min)在用(yong)于檢(jian)查時，為避免培養(yang)皿(min)運輸或(huo)搬動過程造(zao)成的影響，宜同(tong)時進行陰性(xing)對照(zhao)試驗，每(mei)次或(huo)每(mei)個區域取1個對照(zhao)皿(min)，與(yu)采(cai)樣皿(min)同(tong)法操作(zuo)但不得暴露采(cai)樣皿(min)，然后(hou)(hou)與(yu)采(cai)樣后(hou)(hou)的培養(yang)皿(min)(TSA或(huo)SDA)一(yi)起放(fang)入培養(yang)箱內培養(yang)，結果應(ying)無菌(jun)落生長(chang)。

　　5.5 記錄

　　測試報告中應包(bao)含(han)以(yi)下內(nei)容

　　a)測(ce)試(shi)者的(de)名稱和地址，測(ce)試(shi)日期;

　　b) 測試依據

　　c)試無菌室(shi)的平(ping)面(mian)位置(zhi)(必要時標(biao)注相(xiang)鄰區域平(ping)面(mian)位置(zhi));

　　d)有關測(ce)(ce)試(shi)儀(yi)器及其測(ce)(ce)試(shi)方(fang)法的(de)(de)描(miao)述：包括(kuo)測(ce)(ce)試(shi)環(huan)境條件，采(cai)樣點數(shu)目(mu)及布置圖，測(ce)(ce)試(shi)次(ci)數(shu)，采(cai)樣流(liu)量(liang)，或可能存在的(de)(de)測(ce)(ce)試(shi)方(fang)法的(de)(de)變更，測(ce)(ce)試(shi)儀(yi)器的(de)(de)檢定證書等;若為動態(tai)測(ce)(ce)試(shi)，則(ze)還應記錄現場操作人員數(shu)量(liang)及位(wei)置，現場運轉設備和數(shu)量(liang)和位(wei)置;

　　e)結果：包括所有統計計算資料。

　　5.6 結(jie)果計(ji)算

　　5.6.1 用計數方(fang)法(fa)得出各(ge)個(ge)培(pei)養皿的(de)菌落數。

　　5.6.2 每個(ge)測點的(de)浮游菌平均濃度的(de)計算，見式(1)。

　　平(ping)均濃度(個/m3)= 菌落數(shu)/ 采樣量??????????????? (1)

　　例1：某(mou)測點采樣量為400L，菌落數為1，則：

　　平(ping)均濃度=1/0.4=2.5個/m3

　　例2：某測點(dian)采樣量為2m3，菌落數(shu)為3，則：

　　平均濃度(du)=3/2=1.5個(ge)/m3

　　5.7 結果評定(ding)

　　5.7.1 每個測(ce)點的(de)浮游菌(jun)平均濃度必須低于所選定的(de)評定標準中(zhong)關于細菌(jun)濃度的(de)界限(xian)。

　　5.7.2 在(zai)靜態(tai)測(ce)試時，若某測(ce)點的浮游菌平均濃度過評定標準(zhun)，則應重新采樣兩(liang)次，兩(liang)次測(ce)試結果均合(he)格才能判(pan)為符合(he)。

　　5.8 日常監(jian)控

　　對于浮游菌的(de)(de)監控(kong)，宜設定(ding)糾偏限度(du)和(he)警戒限度(du)沿(yan)單一(yi)方(fang)(fang)向呈平行流線(xian)并(bing)且(qie)與氣流方(fang)(fang)向垂直的(de)(de)斷面上風速的(de)(de)氣流，以(yi)保證(zheng)無菌室(shi)的(de)(de)微(wei)生(sheng)物濃度(du)受到(dao)控(kong)制。應(ying)定(ding)期以(yi)檢查(cha)微(wei)生(sheng)物負荷以(yi)及消(xiao)毒劑(ji)的(de)(de)效(xiao)力，并(bing)非作傾向分析(xi)。靜態(tai)和(he)動態(tai)的(de)(de)監控(kong)都可(ke)以(yi)采用該(gai)方(fang)(fang)法。

　　對于(yu)浮(fu)游菌的取樣(yang)頻率次(ci)，如果出現下列情況應考慮(lv)應修改，在(zai)評估以下情況，也(ye)應確定其(qi)他項(xiang)目的檢測(ce)頻次(ci)：

　　---------------連續過糾偏和警戒(jie)限度(du);

　　---------------停工時間比預計(ji)延長;

　　--------------生(sheng)產(chan)期(qi)間，空氣凈化系統(tong)進行任何重大的維修;

　　--------------常(chang)操做(zuo)記錄放(fang)映出傾向性的數據(ju);

　　--------------消(xiao)毒規程的(de)改變(bian);

　　--------------生物污染等(deng);

　　--------------當生產(chan)設(she)備(bei)有重大維(wei)修或增(zeng)加(jia)設(she)備(bei)時;

　　--------------當(dang)無(wu)菌室結構區域分布有(you)重大變(bian)動時。