潔凈區(qu)的(de)環(huan)境監測(ce)如何操作

潔凈區潔凈等級劃分(fen)為：

級：指高風險操作(zuo)區，如：灌(guan)裝(zhuang)、放置膠塞桶(tong)、敞(chang)口安瓿瓶、敞(chang)口西林瓶的(de)(de)區域(yu)及無菌裝(zhuang)配或連接操作(zuo)的(de)(de)區域(yu)。通常用層流(liu)操作(zuo)臺（罩(zhao)）來維(wei)持該(gai)區的(de)(de)環境狀態(tai)。

B級：指無菌配制和灌裝等(deng)高風險操作X級區所(suo)處的背景區域。

C級(ji)和D級：指(zhi)生產無菌(jun)藥(yao)品(pin)過程(cheng)中重要程(cheng)度較(jiao)次的(de)潔凈操(cao)作區。

此外還(huan)有(you)一(yi)些諸(zhu)如(ru)CNC， 百(bai)級(ji)、千級(ji)、之類的(de)概念(nian)，這里不做(zuo)展開(kai)討論。

目錄

一溫(wen)濕度

二(er)靜壓差

三噪音

四照度

五沉降菌

六(liu)浮游菌

一(yi)、溫濕(shi)度

標(biao)準規定：潔凈區(qu)的溫度和(he)相對濕度與藥品生產工藝要求相適應。無特殊要求時(shi)，潔凈區(qu)溫度為18℃～26℃，相對濕(shi)度控制在45%～65%。有特殊要求車間根據工藝控制。

溫度觀察(cha)：檢查溫濕度計(ji)(ji)是否完整(zheng)，視線正對溫濕度計(ji)(ji)水平(ping)讀取顯示的數據，需要(yao)記錄的應立即(ji)填入表(biao)格中(zhong)。

濕(shi)度(du)觀(guan)察：視線正對濕(shi)度(du)表，準確讀數。需(xu)記錄的應(ying)立即填入表格(ge)中。

需要(yao)加水(shui)的濕度計，在觀察前應檢(jian)查在蓄水(shui)腔內是(shi)否有水(shui)，無水(shui)則需加入適量(liang)水(shui)，再觀察濕度。

潔凈區的溫濕度每天至少記錄兩次，上午一次，下午一次。

設(she)備計量人員每(mei)年至少組織校驗一次監控系統的儀器設(she)備。

二、靜壓差

標準規定：潔(jie)凈區與(yu)非潔(jie)凈區之(zhi)間、不同等級(ji)潔(jie)凈區之(zhi)間的壓差應不低于(yu)10帕斯卡，相(xiang)同潔凈度(du)等級(ji)不(bu)同功能的操作間之間應保(bao)持(chi)2-3帕的壓差梯(ti)度，以防止污(wu)染(ran)(ran)和交(jiao)叉污(wu)染(ran)(ran)。

產塵房間(jian)(jian)與相鄰房間(jian)(jian)呈相對負壓。

潔(jie)(jie)凈(jing)(jing)區的靜壓差以微壓差計顯示，每日(ri)至(zhi)少(shao)記錄兩次(ci)，上午一(yi)次(ci)，下午一(yi)次(ci)。（包(bao)括潔(jie)(jie)凈(jing)(jing)區與室(shi)外，不同潔(jie)(jie)凈(jing)(jing)級別間及(ji)所有(you)有(you)壓測(ce)試時所有(you)的空調系統和層流系統應處于連續(xu)的正常(chang)運行狀態。

潔凈室所有的(de)門應關(guan)閉，測(ce)試時不允許(xu)有人穿(chuan)越(yue)房間。

當發現監測結果超出標準規定的范圍時，應立(li)即檢查原因，必要時對(dui)空調系統進行(xing)調整。

三、噪音

標準規定：潔凈(jing)區噪音不得高(gao)于70分貝(bei)。

潔凈區的(de)(de)噪音(yin)檢查每年(nian)不得少于一次，在經過設備大修、廠(chang)房改造、工藝布局調整等變更的(de)(de)時候應在變更結束后(hou)重(zhong)新(xin)檢測噪音(yin)。

檢測方法(fa):檢測點(dian)布置，當面積≤50m2時，僅測房間中心一個點；當房間面積較(jiao)大時，每增加50m2增(zeng)加一個(ge)點，測點距在1.2m。

四、照(zhao)度(du)

標準規定：潔(jie)凈區(qu)主要操作間照度不得少(shao)于300勒(le)克(ke)斯(si)，一(yi)般照(zhao)明的照(zhao)度均勻度不應小于0.7。

潔凈(jing)區的照度(du)檢查每年(nian)不得少于一次，在經過(guo)設備大修、廠(chang)房(fang)改造、工藝布(bu)局調(diao)整(zheng)等變(bian)(bian)更的時候應在變(bian)(bian)更結束后重新檢測照度(du)。

檢測(ce)要求(qiu)：室(shi)內照(zhao)度(du)測(ce)度(du)必須在室(shi)溫已趨(qu)穩定(ding)，光(guang)源光(guang)輸(shu)出趨(qu)于穩定(ding)后進行（對熒(ying)光(guang)燈必須有100h）。

檢測方法:測點平面離地面0.85m，按間距1-2m布(bu)點(dian)(dian)，測(ce)點(dian)(dian)距墻面(mian)1m。其要(yao)求(qiu)基本與潔凈(jing)度(du)的測定(ding)位置要(yao)求(qiu)相同。記錄實測照(zhao)度(du)值并(bing)計(ji)算總的平(ping)均(jun)照(zhao)度(du)。

照(zhao)度測量一(yi)般僅測定除局(ju)部照(zhao)明之外的(de)一(yi)般照(zhao)明。

五、沉(chen)降菌

5.1 方(fang)法概述

本測試方(fang)法利用沉(chen)(chen)降法，即(ji)通過自然沉(chen)(chen)降原理(li)收集在(zai)空氣中的(de)生(sheng)物粒子于培養基平(ping)皿(min)，經(jing)若干(gan)時間，在(zai)適宜的(de)條件(jian)下(xia)讓其繁殖到可(ke)見的(de)菌落(luo)數(shu)，以平(ping)板(ban)培養皿(min)中的(de)菌落(luo)數(shu)來評定(ding)潔(jie)凈環境內的(de)活微(wei)生(sheng)物數(shu)，并以此來評定(ding)潔(jie)凈區的(de)潔(jie)凈度(du)。

5.2 使用的(de)儀器和設備

高壓消毒鍋(guo)：使用時應嚴(yan)格按照操作(zuo)規程進行。

恒溫培(pei)養箱：必須定期對培(pei)養箱的溫度(du)計進行檢定。

培(pei)養皿:一(yi)般采用φ90mm×15mm硼硅酸(suan)玻(bo)璃培養皿。使用(yong)前將培養皿置于121℃濕熱滅菌20min。

培養基：普通營養瓊脂培養基。將(jiang)培養基加熱熔化，冷卻至約45℃在(zai)無(wu)菌(jun)操作條(tiao)件下將培養基注入(ru)培養皿，每(mei)皿約15ml。待瓊脂培(pei)養(yang)基凝固后，將培(pei)養(yang)基平皿(min)放入30～35℃恒(heng)溫(wen)培養箱(xiang)中(zhong)培養48小(xiao)時(shi)，若培養(yang)基(ji)平皿(min)上確無(wu)菌落(luo)生長，即可(ke)供采樣(yang)用(yong)，制備好的培養(yang)基(ji)平皿(min)應在2～8℃的環(huan)境(jing)中(zhong)存放。

5.3 測試步驟(zou)

采樣：將(jiang)已制備好的培養(yang)皿放(fang)置在預先(xian)確(que)定取(qu)樣點(dian)，打開培養(yang)皿蓋(gai)，使培養(yang)基表面暴(bao)露0.5h，再將培養皿蓋上蓋后(hou)倒置。

培養:在30～35℃培(pei)養，時(shi)間為(wei)5天。每批培養(yang)基應有對照試驗，檢查(cha)培養(yang)基本身是否污染，可每批選定3只(zhi)培養皿作對照培養。

菌落計數(shu)：用肉眼直接計數(shu)，然(ran)后用5～10倍放大(da)鏡檢查(cha)，是否有遺漏。若培養皿上有2個或2個以(yi)上菌(jun)落重疊，可分辨時仍以(yi)2個(ge)或2個以上(shang)的菌(jun)落(luo)計(ji)數。

5.4 測試狀態

沉(chen)降菌(jun)測試前，被測試潔凈(jing)區的(de)溫濕度須達到(dao)規定的(de)要求(qiu)，靜(jing)壓差必須控(kong)制(zhi)在規定值內(nei)。

沉降菌(jun)測(ce)試前，被(bei)測(ce)試潔凈(jing)區已經過消毒。

測(ce)試(shi)(shi)狀態有靜態和動態兩(liang)種，測(ce)試(shi)(shi)狀態的選擇(ze)必須符合生產的要求，并(bing)在報告中(zhong)注明測(ce)試(shi)(shi)狀態。

5.5 測試人(ren)員

測試人(ren)員必須穿戴符(fu)合環境(jing)級(ji)別(bie)的工(gong)作服(fu)。靜態測試時，室內測試人(ren)員不得(de)多(duo)于2個人(ren)。

5.6 測試時間(jian)

對單向流，如(ru)X級(ji)凈化(hua)房間(jian)內及層流工(gong)作臺，測(ce)試應在凈化(hua)空調系(xi)統正(zheng)常運行不少于10分鐘后開始。對(dui)非(fei)單(dan)向(xiang)流，如(ru)B級、C級、D級以(yi)上的凈化房間，測試應在凈化空調(diao)系統正常運行(xing)不(bu)少于30分鐘開始。

5.7 沉降菌采(cai)樣點

采樣點(dian)(dian)數(shu)目(mu)及其(qi)布置：最少(shao)(shao)采樣點(dian)(dian)數(shu)目(mu)：沉降菌的(de)最少(shao)(shao)采樣點(dian)(dian)數(shu)可按表(biao)1確定。在(zai)滿(man)足最少(shao)測點數(shu)的同時(shi)，不宜(yi)滿(man)足最少(shao)培養皿數(shu)，見(jian)表(biao)2。

表1最少采樣點數目

表(biao)2最少培養皿(min)數

5.8 采樣點(dian)的(de)布置

工作區測試點位置離地0.8～1.5m左右（略高(gao)于(yu)工作(zuo)面）。可在關鍵設備(bei)或(huo)關鍵工作(zuo)活(huo)動范圍處增加測點(dian)，采樣點(dian)的布(bu)置應力求均勻，避免采樣點(dian)在某局部(bu)區(qu)域過(guo)于(yu)集中(zhong)，某局部(bu)區(qu)域過(guo)于(yu)稀疏。

5.9 結果計算(suan)

用計(ji)數方(fang)法(fa)得出各(ge)個培養(yang)皿的菌落數。

平均菌落數的計算見下式：

式中：m為平均菌(jun)落(luo)數；

m1為1號培(pei)養(yang)皿(min)菌落數；

m2為2號培(pei)養皿菌落數；

mn為n號培養皿菌(jun)落數；

n為培養皿(min)總(zong)數。

結果評定(ding)：用平均菌落數(shu)判斷(duan)潔凈室(shi)的空氣中的微生物。

潔(jie)凈(jing)區內的平均菌落數必(bi)須符(fu)合所選定(ding)的評(ping)定(ding)標準(zhun)。見(jian)表3。

若某潔凈區的菌落(luo)數超(chao)過評定(ding)標準，則必(bi)須(xu)對此區域(yu)先行(xing)消(xiao)毒，然后重新測試(shi)(shi)兩次，測試(shi)(shi)結(jie)果必(bi)須(xu)合格。

重新測試(shi)仍不合格(ge)，按“潔(jie)凈室(shi)環境監控管理(li)規程"進(jin)行超標調查。

5.10 注意事項

測試(shi)用具要做滅菌(jun)處(chu)理，以確保(bao)測試(shi)的可靠性、正確性。

采取(qu)一切措施防止人為對(dui)樣本(ben)的污染。

對培(pei)養基、培(pei)養條(tiao)件及其他參數作詳細的記錄。

由于細菌種類繁多，差別(bie)甚(shen)大，計(ji)數(shu)時(shi)一般用透射光(guang)于培(pei)養皿(min)背(bei)面(mian)(mian)或正面(mian)(mian)仔細觀察，不(bu)要漏(lou)計(ji)培(pei)養皿(min)邊緣生長的(de)菌落，必要時(shi)用顯微鏡鑒別(bie)。

采(cai)樣前應(ying)(ying)仔(zi)細檢查每個培養皿(min)的(de)質量，如發現變質、破損(sun)或(huo)污染的(de)應(ying)(ying)剔除。

六(liu)、浮(fu)游菌

6.1 取樣(yang)前(qian)準備工作

依據檢(jian)測(ce)區(qu)域的(de)取樣(yang)點數，按照《培(pei)養基(ji)配制、滅菌標(biao)準(zhun)操作(zuo)程序》制備適(shi)量的(de)營(ying)養瓊(qiong)脂(zhi)培(pei)養基(ji)。

在超凈(jing)工作(zuo)臺內，以無菌操(cao)作(zuo)法將配(pei)制好(hao)的營養瓊脂(zhi)培養基(ji)以每皿約15ml的裝量分裝，待培養(yang)基凝固后移出潔凈(jing)區。

將制備(bei)的營養瓊脂平皿倒置(zhi)于隔水式恒溫水浴(yu)培(pei)養箱(xiang)內于30～35℃培養48小時。取出逐個(ge)檢查，確(que)認無菌落數后即(ji)可使用。

6.2 采(cai)樣(yang)

將(jiang)上述制(zhi)備(bei)好的(de)營養(yang)瓊脂平皿(min)交與QA人員取樣。

6.3 儀器(qi)、設備(bei)和培養基

浮游菌(jun)采(cai)樣器、培(pei)養皿（φ90mm×15mm）、培養(yang)基（營養(yang)瓊(qiong)脂培養(yang)基）、恒溫培養(yang)箱

6.4 儀器、設備、培養(yang)基的要(yao)求

浮(fu)游菌(jun)采樣器必須(xu)要有流(liu)量(liang)計和定(ding)(ding)時(shi)器。應嚴格按儀器說明書的(de)(de)(de)要求進行(xing)操(cao)作。采樣器必須(xu)按儀器的(de)(de)(de)檢定(ding)(ding)周期，定(ding)(ding)期對儀器作檢定(ding)(ding)，以(yi)保證測試(shi)數據(ju)的(de)(de)(de)可靠(kao)性，檢驗項(xiang)目(mu)有：定(ding)(ding)時(shi)器，轉盤(pan)轉速(su)，流(liu)量(liang)計。每次測試(shi)前(qian)應先接(jie)通電源，啟動真空抽氣泵，然(ran)后調節(jie)流(liu)量(liang)計和定(ding)(ding)時(shi)器。空氣采樣量(liang)根據(ju)需要選定(ding)(ding)，已知采樣器的(de)(de)(de)流(liu)量(liang)（L/min）,設定采樣(yang)時(shi)間（min）兩者相乘即得采樣量（L）。采樣口必須用便于消毒(du)及化(hua)學性(xing)能穩定的(de)材料制造，采樣管嚴禁滲(shen)漏，內壁應(ying)光滑，采樣管的(de)長度應(ying)根(gen)據(ju)測定點的(de)高度定，盡量減少彎(wan)曲(qu)。

6.5 測試方法

測試用(yong)儀器(qi)、培(pei)(pei)養皿表(biao)面(mian)(mian)必須嚴格消(xiao)毒(du)。采(cai)(cai)(cai)樣(yang)器(qi)進入被測房間前(qian)先用(yong)消(xiao)毒(du)劑滅菌(jun)。用(yong)消(xiao)毒(du)劑擦(ca)凈(jing)培(pei)(pei)養皿的(de)(de)外(wai)表(biao)面(mian)(mian)。采(cai)(cai)(cai)樣(yang)前(qian)，先用(yong)消(xiao)毒(du)劑消(xiao)毒(du)采(cai)(cai)(cai)樣(yang)器(qi)的(de)(de)頂盤、轉(zhuan)盤以及罩子(zi)的(de)(de)內(nei)外(wai)面(mian)(mian)，采(cai)(cai)(cai)樣(yang)結(jie)束再用(yong)消(xiao)毒(du)劑輕輕噴射罩子(zi)的(de)(de)內(nei)壁和轉(zhuan)盤。采(cai)(cai)(cai)樣(yang)口及采(cai)(cai)(cai)樣(yang)管使用(yong)前(qian)必須高溫滅菌(jun)，如用(yong)消(xiao)毒(du)劑對采(cai)(cai)(cai)樣(yang)管的(de)(de)外(wai)壁、內(nei)壁進行消(xiao)毒(du)，應將管中的(de)(de)殘留液倒掉并晾(liang)干。采(cai)(cai)(cai)樣(yang)者應穿戴與被測潔(jie)凈(jing)區域相應的(de)(de)工(gong)作服，在轉(zhuan)盤上放入或(huo)調換培(pei)(pei)養皿前(qian)，雙手用(yong)消(xiao)毒(du)劑消(xiao)毒(du)。

6.6 采樣程序(xu)

儀器經消毒(du)后先不放入培養皿(min)，開動真空泵(beng)抽氣，使儀器的(de)殘余(yu)消毒(du)劑蒸發，時間(jian)不少(shao)于5min，并調好(hao)流量、轉盤轉速。關閉真空泵(beng)，放入培養皿，蓋上蓋子后調節采(cai)樣(yang)品縫隙高度(du)。置采(cai)樣(yang)器于(yu)采(cai)樣(yang)點后，開啟采(cai)樣(yang)器、轉動定時(shi)器，根據采(cai)樣(yang)量設定采(cai)樣(yang)時(shi)間。

6.7 測試狀態

浮游(you)菌(jun)測(ce)試(shi)前(qian)微生物限度檢(jian)查(cha)室已經消毒過。測(ce)試(shi)狀態為(wei)靜態測(ce)試(shi)，并在(zai)報告中注明測(ce)試(shi)狀態。

6.8 測試人員

測(ce)試(shi)人員必須穿(chuan)戴符和被(bei)測(ce)環(huan)境級別的(de)工作服。靜態測(ce)試(shi)時，室內人員不得多(duo)于2人(ren)。

6.9 測(ce)試時間

對單向流(liu)，測試應(ying)在凈化空(kong)調系統(tong)正常運行不少于(yu)10min后開始。對非(fei)單向(xiang)流，測試應在凈化(hua)空(kong)調系統正常(chang)運行不少于30min后(hou)開始。

最(zui)少采樣(yang)點數(shu)目及其布(bu)置(zhi)，最(zui)小采樣(yang)量，見(jian)下(xia)表(biao):

工作區(qu)測點位(wei)置離地0.8m～1.5m左右，送風(feng)口測點位(wei)置(zhi)離開(kai)送風(feng)面30cm左右；可(ke)在關鍵(jian)設(she)備或關鍵(jian)工作活(huo)動(dong)范圍處增加測點(dian)。每個采(cai)(cai)樣點(dian)一般(ban)采(cai)(cai)樣一次。對于單(dan)向(xiang)流或送風口(kou)，采(cai)(cai)樣器采(cai)(cai)樣管口(kou)朝向(xiang)應(ying)(ying)正對氣流方向(xiang)；對于非單(dan)向(xiang)流，采(cai)(cai)樣管口(kou)向(xiang)上。布置采(cai)(cai)樣點(dian)時，至少應(ying)(ying)離開塵粒較集中(zhong)的回風口(kou)1m以(yi)上。采樣(yang)時，測(ce)試(shi)人員應站在采樣(yang)口的下風側(ce)。

6.10 培養(yang)

取樣結(jie)束后將(jiang)平(ping)皿復倒(dao)置隔水式(shi)恒溫水浴培養箱內于30～35℃培養(yang)48小時(shi)。并以未采(cai)樣(yang)的(de)營養瓊脂平皿(min)作對照皿(min)。

菌落計數：用肉眼(yan)直接計數，然后用5-10倍(bei)放大鏡檢(jian)查，是否遺(yi)漏。若培養皿上有(you)2個或(huo)2個以上菌(jun)落重疊(die)，可分辨時，仍以2個或2個以(yi)上的菌(jun)落計數(shu)。培養結束，將上述培養后的平皿取出，逐(zhu)個點計菌(jun)落數(shu)，必要時用放大鏡檢查，并記(ji)錄。

6.11 結果計算

平均(jun)菌(jun)落數的(de)計(ji)算見下(xia)式(shi)：

平均菌落(luo)數m=

式中：

m為該房間（或區域）的平均(jun)菌落數；

m1、m2‥‥‥mn為該房(fang)間（或區域）各取樣點(dian)的菌落數；

N為培養皿總數

記(ji)(ji)錄：測(ce)試報(bao)告(gao)中(zhong)應(ying)記(ji)(ji)錄房間溫度(du)(du)、相對濕(shi)度(du)(du)、壓差(cha)、測(ce)試狀(zhuang)態及測(ce)試數據(ju)。